Flow Cytometer at the UIC - FAQ's

What is flow cytometry?

流式细胞术是一种测量相对大小的方法, granularity, 以及悬浮在液体培养基中的细胞群中单个细胞的荧光. 用特定的荧光标记试剂对样品进行染色.g., antibodies). 标记的细胞被488或635纳米激光照射, 并记录荧光发射(荧光强度)和光散射(细胞大小和复杂性).

antibodies

The flow cytometer

UIC有一台Becton-Dickinson FACSCalibur流式细胞仪. This flow cytometer (June, 2000 mfr. date) is a four-color, dual-laser, 台式系统能够使用前向散射进行细胞分析, side scatter, and detection of fluorescence in four distinct color regions: > 670 nm (deep red), 653-669 nm (red), 564-606 nm (orange), and 515-545 nm (green). 仪器采用Mac G4主机，大部分仪器功能由计算机控制. 该仪器还有两个激光器用于激发荧光染料:一个氩激光器, which emits sapphire-colored light at 488 nm, and a red diode laser emitting light at 635 nm.

Becton-Dickinson

这个仪器通常使用什么荧光染料?

这些激光器通常使用的荧光色素包括荧光素, thiazole orange, acridine orange, phycoerythrin, propidium iodide, allophycocyanin, pharmacingen /BD的叶绿素- cy5 (Cy-Chrome)和叶绿素蛋白(peridinin叶绿素protein, PerCP). 请注意，紫外线和绿色激发染料，如DAPI和罗丹明及其衍生物不能与本细胞仪一起使用.

Whom do I talk to at the UIC about flow cytometry?

Call Mark Townley at 603-862-0632 or email mtownley@cisunix.hadeslo.com for more information.

How do I submit samples for analysis?

You need to make an appointment with Mark Townley. 请在您的样品运行前至少24小时预约. If you are late or miss an appointment, 您仍然需要支付整个预定时间的费用, unless you cancel at least 24 hours in advance. 

目前，我们不对UIC以外的任何人进行乐器培训, so all samples are run by a UIC technician. 所有要运行的样品应该是无毒的，非传染性的，非致病性的，固定的. 如果担心样品的毒性和/或安全性，UIC保留拒绝运行样品的权利. 有关永利app新版本官网地址流式细胞术政策的更多信息, 请参阅大学的生物及化学安全计划.

所有样品应在提交前填写样品提交表.

sample submission form

What size cells can be analyzed? In what concentration?

FACSCalibur流式细胞仪最适合于分析直径在1至50 μ m(微米)之间的细胞或颗粒的水悬液。. 重要的是，您过滤聚合样品70微米尼龙细胞过滤器(由猎鹰制造), 零件号352350)，然后在仪器上运行. 如果细胞已经聚集到你可以在样管中看到它们的程度(并且涡流混合器不会打破团块), the sample will plug the flow cell on the instrument.

理想情况下，每毫升样品应含有1 × 106个细胞或颗粒.

样品应装入12 x 75毫米猎鹰牌5毫升聚苯乙烯圆底管(零件号352003)。.

How much sample do I need?

即使样品消耗量可以在12 uL/min和60 uL/min之间变化(允许分析相对较小的样品), please submit a volume of at least 1mL.

Anything else I should consider?

要对实验得出结论，适当的控制是至关重要的. Make sure you have positive and negative controls. You will always end up needing one more control than you have; so when in doubt, 准备比你认为你需要的更多的控制. 阴性对照为未染色样品(自体荧光)!!)或仅用二级染色的样品(如果这是您使用的系统). 如果您的样品在每个试管中染色超过一种荧光染料, 带大量的样品分别用每种荧光染料染色. This is for compensation purposes. 有关此过程的解释，请参阅Mario Roederer的网站 compensation.

UIC的工作人员将提供尽可能多的技术支持、建议和指导. However, UIC不对样品制备不良或实验设计缺陷引起的问题负责.

Good Books on Flow Cytometry

  • Alice Givan的《永利app新版本官网地址》(非常好的介绍)
  • Practical Flow Cytometry by Howard Shapiro
  • 流式细胞术:Michael Ormerod的实用方法(永利app新版本官网地址DNA的好信息)

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